亚细胞定位PTEN基因真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 姜新 曲雅勤 朱向辉 李亮 李洪凌
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 亚细胞定位 PTEN基因 质粒
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1057-1060
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人野生型亚细胞定位PTEN基因真核表达载体,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:以胎盘组织RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增H的基因片段.PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-PTEN质粒,进行酶切鉴定和测序.以T-PTEN质粒为模板,利用PCR技术将核定位信号(NSL)加入PTEN序列.PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-NSL-PTEN质粒.真核表达载体pcDNA3.1及T-NSL-PTEN质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后连接,转化大肠杆菌,获得重组载体pcDNA3.1-NSL-PTEN,进行酶切和测序鉴定.结果:重组质粒PUM-PTEN酶切在1 200 bp处见目的片段,与预期结果符合.测序结果显示基因序列与目的基因完全一致;重组质粒PUM-NSL-PTEN酶切在1 200 bp处见目的片段,测序结果显示基因序列与设计一致,核定位信号成功加入;重组质粒pcDNA3.1-PTEN酶切在1 200 bp处见目的片段,测序结果显示基因序列与目的基因相同;重组载体pcDNA3.1-NSL-PTEN经双酶切和测序证实了其正确性EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切在1 200 bp处见目的片段,与预期结果一致.测序结果显示,核定位信号成功加入,其后是阅读框架正确的PTEN基因序列.结论:成功构建可表达亚细胞定位PTEN的真核表达载体pcDNA3.1-NSL-PTEN.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜新	吉林大学第二医院放疗科	56	507	13.0	20.0
2	曲雅勤	吉林大学第二医院放疗科	60	410	12.0	16.0
3	朱向辉	吉林大学第二医院放疗科	4	18	3.0	4.0
4	李亮	复旦大学附属金山医院医学影像中心	12	160	5.0	12.0
5	李洪凌	吉林大学第二医院放疗科	4	17	3.0	4.0