H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA方法的初步建立

• 作者: 刘华雷 张晓勇 李鹏 郑其升 陈溥言
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: H5N1亚型禽流感病毒 血凝素基因 原核表达 iHA-ELISA
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传学和分子生物学
• 页码范围: 58-61
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3597字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.01.014

摘要

根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因,将该片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-HA1.阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,HA1基因获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在.通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定了表达HA1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.8mmol/L,诱导时间为3h.Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性.以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测H5亚型AIV抗体的iHA-ELISA方法.结果表明,抗原的最佳包被浓度为4μg/mL,血清的最佳稀释度为1:200,阳性标准初步定为:OD待检血清＞0.5,且OD待检血清/OD阴性血清＞2.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	269	2875	28.0	40.0
2	郑其升	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	13	217	8.0	13.0
3	李鹏	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	20	215	8.0	14.0
5	刘华雷	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	9	160	6.0	9.0
6	张晓勇	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	1	45	1.0	1.0