外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达

• 作者: 刘一 单玉兴 吴宏 张绍昆 徐莘香
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛素样生长因子-1 绿色荧光蛋白 软骨细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 软骨与骨组织工程
• 页码范围: 278-280
• 页数: 3页
• 分类号: R6
• 字数: 3338字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1001-9030.2005.03.007

摘要

目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)-1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF-1基因工程化的关节软骨细胞.方法利用基因重组技术,将GFP cDNA片段插入pcDNA3.1-hIGF-1载体中,构建重组载体pcGI.然后采用脂质体方法,转染原代关节软骨细胞,经G418筛选后,继续体外单层培养4周.原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF-1的表达,荧光显微镜观察GFP的表达,Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力.结果根据重组载体pcGI内的酶切位点,设计采用BamH I酶切显示为线性化,Xba I酶切显示为512 bp、1 768 bp、5 915 bp三个片段,HindⅢ则酶切下3 023 bp、5 172 bp二个片段,证明所构建的质粒方向及大小正确,含有GFP和hIGF-1 cDNA片段.稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF-1和GFP的表达,同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强,并能维持Ⅱ型胶原的表达.结论外源性hIGF-1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达,体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强,同时维持软骨细胞表型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴宏	吉林大学第二医院眼科	29	164	9.0	10.0