RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位

• 作者: 宋忆淑 李玉新 谭大鹏 费向东 鲍永利
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: s-lap基因 克隆 s-lap/GFP 融合蛋白 基因表达 基因定位
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 11-13
• 页数: 3页
• 分类号: R739.8
• 字数: 3022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2005.01.004

摘要

目的克隆新基因s-lap编码区序列,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位.方法分析s-lap cDNA序列,建立视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞光损伤模型,RT-PCR克隆其编码区序列,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-GFP/s-lap,转染B16黑色素瘤细胞,观察s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位.结果 s-lap cDNA序列含有编码101个氨基酸的开放读码框架,有2个可能的N-糖基化位点,1个可能的casein kinase II 磷酸化位点和2个可能的 PKC磷酸化位点;成功地克隆了s-lap蛋白编码区序列,构建了其真核表达载体,荧光显微镜观察,在转染pcDNA3.1-GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中,荧光呈网状分布于细胞浆内,而细胞核内低表达;在转染s-lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中,荧光均匀分布于整个细胞,尤其以细胞核内高表达.结论新基因s-lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达,并以细胞核内高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	费向东		5	15	2.0	3.0