neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义

• 作者: 向淑利 张晓萍 蔡方成 邓兵
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 空肠弯曲菌 neuB1基因 唾液酸 格林-巴利综合征 突变体
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 538-543
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.07.006

摘要

目的构建唾液酸合成酶基因1(neuB1)失活、脂多糖(LPS)中唾液酸(SA)缺失的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, Cj)O∶19突变株,以确认Cj LPS中,含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林-巴利综合征(GBS)发病机理中的关键作用. 方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O∶2 DNA中,将含卡那霉素抗性基因(KmR cassette)的neuB1突变片段--neuB1::KmR克隆到pGEM-T载体,形成突变载体pGEM-neuB1::KmR,进一步转化到与GBS相关的Cj O∶19野生株,获得Cj O∶19突变株,行PCR和RT-PCR鉴定.SDS-PAGE分析Cj LPS,过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测Cj LPS中SA.霍乱毒素B亚单位(CTB)结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构.最后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠,第5周取坐骨神经原纤维分离. 结果 neuB1基因突变片段--neuB1::KmR成功克隆到pGEM-T载体中,进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株.后者LPS已丧失SA基团且不能与CTB结合,表明其菌体裂解物和LPS中已不存在GM1模拟结构.野生株LPS免疫组中,17.3%的坐骨神经原纤维发生免疫性损伤,明显高于PBS对照组(1.6%)和突变株LPS免疫组(2.4%);而突变株LPS免疫组与PBS对照组间差异无统计学意义. 结论成功构建neuB1基因失活的Cj O∶19突变株,其LPS已缺失野生株所具有的SA基团及与GM1的分子模拟特性,且不能再诱导活体动物的周围神经免疫性损伤,有力证实了关于Cj LPS诱发GBS的分子模拟推论,SA是该交叉免疫反应中抗原的重要成分.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡方成	重庆医科大学附属儿童医院神经内科	118	617	12.0	17.0
2	向淑利	泸州医学院附属医院神经内科	7	14	2.0	3.0