刺激ECV304细胞增殖的新基因EOLA1的克隆和功能研究

• 作者: 刘月明 杨宗城 梁自文 罗向东 陈渝
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮高表达脂多糖相关因子1 内皮细胞 脂多糖 金属硫蛋白2A 酵母双杂交 细胞保护
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 518-523
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4220字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2005.05.010

摘要

目的扩增内皮细胞受内毒素刺激后上调表达的新序列标签ST55(GenBank No. BM121646)全长cDNA序列并研究其结构和生物学功能. 方法应用快速扩增cDNA末端技术延伸ST55获得其全长cDNA序列,以Northern杂交检测其组织分布,通过酵母双杂交筛选其胞内相互作用蛋白,在ECV304细胞中稳定转染目的基因并强制表达后观察细胞生长变化.结果获得1个全长为1404碱基的cDNA序列,作为人类新mRNA被GenBank接受(AY074889),命名为内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1, EOLA1).生物信息学分析显示EOLA1基因含5个外显子,定位于染色体Xq27.4,编码蛋白质由158个氨基酸组成,分子量为1789.Northern印迹显示EOLA1在人各组织和癌细胞系有不同的表达;以EOLA1 cDNA作为诱铒,进行酵母双杂交筛选人肝cDNA文库,鉴定了金属硫蛋白2A(metallothionein 2A, MT2A)为其相互作用蛋白并采用免疫共沉淀验证了这一结果.高表达EOLA1显著促进了ECV304细胞增殖.结论EOLA1是人内皮活化相关新基因,EOLA1与MT2A的相互作用可能在炎症反应中细胞内保护方面发挥作用.