东海贻贝抗菌肽Myticin A基因的克隆表达及其生物学活性

• 作者: 仲燕 冯伟华 刘军华 张建鹏 焦炳华
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 抗菌肽 Myticin A 贻贝 重组质粒 毕赤酵母 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-68
• 页数: 4页
• 分类号: R978.69
• 字数: 3084字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2005.01.024

摘要

目的:在毕赤酵母表达系统中表达贻贝抗菌肽Myticin A并检测其生物学活性.方法:提取贻贝总mRNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增得到DNA片段.PCR产物与pMD18-T连接,得到阳性重组载体pMD18-Myticin A.Myticin A基因插入载体pPIC9K中,得到的重组载体pPIC9K-Myticin A转化至宿主菌中.得到高抗性阳性菌株并进行诱导表达.发酵上清进行Tricine-SDS-PAGE分析并用CM-sepharose柱和Sephadex G-25柱纯化,Western印迹法鉴定并检测生物学活性.结果:获得重组载体pPIC9K-Myticin A.高抗性多拷贝阳性表达菌株GS115/pPIC9K-Myticin A经甲醇诱导后,Tricine-SDS-PAGE证实其相对分子质量为4 500,表达量为14%以上,纯化后纯度达到90%以上.Western印迹法证实所表达样品为Myticin A.表达样品对巨大芽胞杆菌的生长有抑制作用,对小鼠成纤维细胞(L929)、胰腺癌细胞(SW1990)、结肠腺癌细胞(LoVo)的生长均有明显抑制作用.结论:应用毕赤酵母表达系统能较好地表达抗菌肽Myticin A,生物学活性研究证实其具有抗革兰阳性菌作用,明显抑制肿瘤细胞生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦炳华	第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室	215	1714	20.0	33.0
2	冯伟华	第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室	46	727	15.0	26.0
3	刘军华	第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室	20	423	9.0	20.0
4	张建鹏	第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室	41	597	14.0	24.0
5	仲燕	第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室	4	87	4.0	4.0