构建大鼠前甘丙肽原基因修饰永生化星形胶质细胞株对镇痛研究的意义

• 作者: 安珂 杨辉 王鹏 田玉科 高峰
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 镇痛 神经肽类 星形细胞 细胞系
• 年，卷（期）: 2005,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 109-111
• 页数: 3页
• 分类号: R441.1
• 字数: 4059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.14.064

摘要

目的:转基因细胞移植镇痛是慢性疼痛治疗的新方向,构建大鼠前甘丙肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株,为转甘丙肽基因细胞移植镇痛的研究提供理论依据.方法:实验于2003-05/2004-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室完成.采用DNA重组技术将质粒pBS KS(+)-前甘丙肽原中的大鼠前甘丙肽原基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,经酶切鉴定和测序分析后,采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(+)-前甘丙肽原和空质粒pcDNA3.1(+)分别转染永生化大鼠星形胶质细胞株,经G418(600mg/L)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养.采用免疫细胞化学法、反转录-聚合酶链反应和放射免疫法检测转染细胞大鼠甘丙肽的表达及分泌,同时检测Neo基因的存在以证实转染成功.结果:重组质粒经酶切后分别出现5.4kb和521 bp片段,测序分析与文献报道结果一致,表明重组质粒pcDNA3.1(+)-前甘丙肽原亚克隆成功.Neo基因检测显示重组质粒和空质粒已成功转染到星形胶质细胞株中,筛选获得星形胶质细胞株/前甘丙肽原和星形胶质细胞株/Neo两种细胞株.星形胶质细胞株,星形胶质细胞株/前甘丙肽原和星形胶质细胞株/Neo的前甘丙肽原免疫染色均阳性,平均光密度分析结果显示星形胶质细胞株/前甘丙肽原的前甘丙肽原表达明显高于星形胶质细胞株/Neo和星形胶质细胞株(P＜0.001).星形胶质细胞株/前甘丙肽原细胞与星形胶质细胞株/Neo和星形胶质细胞株细胞相比,前甘丙肽原mRNA表达水平和培养上清液中前甘丙肽原的分泌量明显增高(P＜0.001),而星形胶质细胞株细胞与星形胶质细胞株/Neo细胞相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:成功构建了大鼠前甘丙肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株(星形胶质细胞株/前甘丙肽原),为该转基因细胞移植用于镇痛的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高峰	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室	89	489	12.0	18.0
2	王鹏	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室	116	969	14.0	26.0
3	田玉科	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室	218	1564	18.0	31.0
4	杨辉	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室	52	362	9.0	17.0
5	安珂	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室	14	81	5.0	8.0