以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒

• 作者: 张华荣 杜志游 洪健 王冲 陈绍宁 陈集双
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 百合病毒 内参照 多重RT-PCR 18S rRNA 分子检测
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 204-211
• 页数: 8页
• 分类号: S432.41
• 字数: 4737字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0412-0914.2006.03.002

摘要

本研究对多重PCR体系各成分和循环参数进行了摸索和优化,建立了以18S rRNA为内参照的同时检测3种百合病毒的多重RT-PCR体系,所检测的3种病毒是黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)和百合无症病毒(LSV).它们为侵染我国百合的主要病毒.在RT反应体系中加入3种病毒和18S rRNA的特异性反向引物的混合物,使反应体系中各反向引物终浓度均为0.5 μmol/L,反转录酶(AMV)反转录合成各病毒和18S rRNA的互补第一链cDNAs.多重RT-PCR条件实验显示:将标准RT-PCR体系中的Taq HS DNA聚合酶量改为0.100 U/μL,Mg2+浓度改为4.0 mmol/L,各引物浓度选择0.2 μmol/L,那么25个循环反应以上就能在一个反应管中以18S rRNA为内参照同时检测百合中的3种常见病毒.用该体系检测了10个百合样品,同时与32P同位素标记膜杂交检测作对照,结果显示,该检测体系检测灵敏度更高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪健	浙江大学实验中心	75	1279	19.0	31.0
2	杜志游	浙江理工大学生物工程研究所	18	77	4.0	8.0
3	张华荣	浙江理工大学生物工程研究所	3	48	2.0	3.0
4	陈集双	浙江理工大学生物工程研究所	63	692	15.0	23.0
5	王冲	浙江理工大学生物工程研究所	2	42	1.0	2.0
6	陈绍宁	浙江理工大学生物工程研究所	7	63	3.0	7.0