实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸载量的测量不确定度构成分析

• 作者: 余南 崔进 李汛 毕晓云 陈小坚
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 肝炎病毒 乙型 核酸类 不确定度
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: R5
• 字数: 5018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2006.01.011

摘要

目的 研究实时荧光定量PCR用于HBV核酸载量检测时的测量不确定度构成.方法 采用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清标本中HBV核酸载量,收集检测过程中的各类数据,计算以下6种来源的测量不确定度,对该方法的测量不确定度构成进行评估.(1)标本浓缩的不确定度(uenrich);(2)核酸提取的不确定度(uex);(3)扩增反应体系的不确定度(upcr);(4)热循环仪的不确定度(uins);(5)数据处理的不确定度(uana);(6)加样枪的不确定度(upip).其中热循环仪的不确定度检测样本数为7份,其他各种不确定度检测的样本数为10份.结果 核酸浓度为5.610E+07拷贝/ml的标本,其浓缩过程来源的相对不确定度达0.437核酸提取来源的浓度真值无偏估计在6.585E+03、9.067E+04、7.223E+06拷贝/ml样本的相对不确定度分别为0.249、0.173、0.140;热循环仪和数据分析来源的相对不确定度分别为0.020和不大于0.050.结论 标本制备过程中的浓缩和DNA提取步骤所带来的不确定度是实时荧光定量PCR检测HBV核酸载量测量不确定度的主要分量,因此标本制备处理的方法与标准操作程序能否有效地提取核酸并去除PCR反应的抑制物对于该项检测十分关键;起始模板浓度与测量不确定度相关,低浓度的样本显示出更大的相对不确定度.