eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用

• 作者: 周虹 江千里 江汕 温丽敏 王健民 胡晓霞 许小平
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 基因标记 动物模型 逆转录病毒载体 灌注固定
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 296-300
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R457.2
• 字数: 4611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2006.04.013

摘要

目的:以携带绿色荧光蛋白基因(eGFP)的重组逆转录病毒(RV)标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用.方法:制备高滴度eGFP-RV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP+的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效.结果:eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP+率＞99.2%.P388-eGFP细胞体外传代3个月后eGFP+率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)%(n=3).eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性.多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP+细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eGFP+细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性.结论:成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许小平	第二军医大学长海医院血液科	62	260	10.0	12.0
2	王健民	第二军医大学长海医院血液科	194	921	13.0	22.0
3	周虹	第二军医大学长海医院血液科	52	314	8.0	15.0
4	胡晓霞	第二军医大学长海医院血液科	43	129	6.0	8.0
5	江千里	第二军医大学长海医院血液科	35	128	7.0	9.0
7	江汕		34	184	8.0	12.0
10	温丽敏	第二军医大学长海医院血液科	8	109	5.0	8.0