应用逆转录病毒载体构建荧光标记的K562细胞模型

• 作者: 吴雨洁 周小玉 汪承亚 缪扣荣 费小明
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 逆转录病毒 流式细胞仪 NK细胞 K562
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 656-660,封2
• 页数: 6页
• 分类号: R730.5
• 字数: 2984字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2007.07.003

摘要

目的:采用逆转录病毒载体系统构建荧光标记的K562细胞模型.方法:将增强绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA插入载体pCMV-hyg,构建重组质粒pCMV-EGFP-hyg,并与逆转录病毒载体质粒pCMV-G和pCMV-GP共转染293T细胞生产重组逆转录病毒,感染K562细胞;通过Hyg筛选建立EGFP自身标记的K562细胞模型.应用流式细胞仪及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达.比较EGFP-K562细胞与K562细胞生长曲线.通过外周血淋巴细胞的NK活性试验观察EGFP-K562能否用于有关实验研究.结果:应用EGFP cDNA成功构建pCMV-EGFP-hyg,与逆转录病毒载体系统质粒共转染293T细胞后产生含EGFP的重组逆转录病毒,48 h收集的病毒滴度达1.5×106 CFU/ml.重组逆转录病毒感染K562细胞后,经Hyg筛选,98%以上稳定表达EGFP.长期培养20代,EGFP表达稳定,对K562细胞生长无影响.以EGFP-K562为靶细胞的NK活性试验显示40:1效靶比,孵育4 h最敏感.结论:应用逆转录病毒载体系统成功构建稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞模型,NK活性试验提示EGFP-K562可用作实验研究的新型靶细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪承亚	南京医科大学第一附属医院输血科	49	415	11.0	18.0
2	吴雨洁	南京医科大学第一附属医院血液科	51	242	9.0	11.0
3	缪扣荣	南京医科大学第一附属医院血液科	20	68	5.0	7.0
4	周小玉	南京医科大学第一附属医院输血科	25	200	8.0	13.0
5	费小明	南京医科大学第一附属医院血液科	13	78	6.0	8.0