携带EGFP基因的逆转录病毒载体的构建及初步应用

• 作者: GUO Zhong-min 赵宁 郭中敏 陈系古
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: EGFP基因 逆转录病毒载体 pLXSN-EGFP 转染 SW038-C2细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 154-159
• 页数: 6页
• 分类号: R730.5
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2009.02.007

摘要

[目的]构建携带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的逆转录病毒载体,观察GFP的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响.[方法]以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应,获得完整保留pEGFP-C1载体多克隆酶切位点(MCS)的EGFP基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN,筛选出正确的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP,转染PA317包装细胞后获得具有感染能力的病毒颗粒,转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2,通过荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)观察EGFP做为报告基因在体外的表达情况、以及对靶细胞生物特性的影响.[结果]成功克隆携带有EGFP基因的逆转录病毒载体,该载体经包装细胞包装后可有效转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2并稳定表达,对靶细胞的生长无抑制.高表达FP的靶细胞形态变得细长,FACS检测约有98%的细胞表达GFP,体外培养6个月荧光强度没有明显的衰减.而低表达GFP的靶细胞形态无变化,FACS检测有30%细胞表达GFP.[结论]使用GFP作为报告基因,检测到的病毒载体转染率比实际偏低,所构建的pLXSN-EGFP载体可在体外稳定表达,为再插入治疗用基因进行后续研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈系古	中山大学实验动物中心	48	319	9.0	15.0
2	郭中敏	中山大学实验动物中心	57	251	9.0	13.0
3	赵宁	中山大学实验动物中心	2	6	2.0	2.0
4	GUO Zhong-min	中山大学实验动物中心	1	3	1.0	1.0