基于高内涵分析方法建立稳定共表达人δ阿片受体与 PKAcat-EGFP的CHO细胞模型

• 作者: 宫泽辉 李玉蕾 王莉莉 苏瑞斌 颜慧
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,阿片,δ 蛋白激酶A 高内涵分析 信号转导 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 176-182
• 页数: 7页
• 分类号: R965
• 字数: 4116字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2018.03.003

摘要

目的 利用高内涵分析(HCA)方法用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞建立人δ阿片受体(hDOR)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的蛋白激酶A催化亚基(PKAcat)融合蛋白(PKAcat-EGFP)稳定共表达的细胞模型,为体外高通量筛选作用于hDOR的药物及药物分子机制研究奠定基础.方法 通过脂质体介导法将潮霉素B抗性的hDOR重组质粒(pcDNA3.1/Hygro(+)-hDOR)转染入已稳定表达PKAcat-EGFP的CHO细胞中,随后用含潮霉素B的选择性培养基培养细胞,有限稀释法挑取耐药单克隆,PKA重分布实验筛选阳性克隆,利用Z′因子对建立的细胞模型的可靠性进行评价,利用PKA重分布实验与LANCE cAMP 384试剂盒检测受体功能.结果 PKA重分布实验与LANCE cAMP 384试剂盒检测结果表明,CHO-PKAcat-EGFP/hDOR-3号克隆反应性良好,特异性DOR激动剂SNC80100 nmol·L-1作用时的Z′平均值为0.615,表明该细胞模型可靠,经多次传代后,细胞中的hDOR在40代以内能保持稳定表达,SNC80可浓度依赖性地激活细胞上的hDOR,其EC50值为(6.192±1.225)×10-9 mol·L-1.结论 成功建立了hDOR与PKAcat-EGFP融合蛋白稳定共表达的细胞模型CHO-PKAcat-EGFP/hDOR-3.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王莉莉	军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所	2	2	1.0	1.0
3	颜慧	军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所	8	7	1.0	2.0
6	李玉蕾	军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所	2	0	0.0	0.0
23	宫泽辉	军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所	1	0	0.0	0.0