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基于高内涵分析方法建立稳定共表达人δ阿片受体与 PKAcat-EGFP的CHO细胞模型
基于高内涵分析方法建立稳定共表达人δ阿片受体与 PKAcat-EGFP的CHO细胞模型
作者:
宫泽辉
李玉蕾
王莉莉
苏瑞斌
颜慧
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
受体,阿片,δ
蛋白激酶A
高内涵分析
信号转导
CHO细胞
摘要:
目的 利用高内涵分析(HCA)方法用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞建立人δ阿片受体(hDOR)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的蛋白激酶A催化亚基(PKAcat)融合蛋白(PKAcat-EGFP)稳定共表达的细胞模型,为体外高通量筛选作用于hDOR的药物及药物分子机制研究奠定基础.方法 通过脂质体介导法将潮霉素B抗性的hDOR重组质粒(pcDNA3.1/Hygro(+)-hDOR)转染入已稳定表达PKAcat-EGFP的CHO细胞中,随后用含潮霉素B的选择性培养基培养细胞,有限稀释法挑取耐药单克隆,PKA重分布实验筛选阳性克隆,利用Z′因子对建立的细胞模型的可靠性进行评价,利用PKA重分布实验与LANCE cAMP 384试剂盒检测受体功能.结果 PKA重分布实验与LANCE cAMP 384试剂盒检测结果表明,CHO-PKAcat-EGFP/hDOR-3号克隆反应性良好,特异性DOR激动剂SNC80100 nmol·L-1作用时的Z′平均值为0.615,表明该细胞模型可靠,经多次传代后,细胞中的hDOR在40代以内能保持稳定表达,SNC80可浓度依赖性地激活细胞上的hDOR,其EC50值为(6.192±1.225)×10-9 mol·L-1.结论 成功建立了hDOR与PKAcat-EGFP融合蛋白稳定共表达的细胞模型CHO-PKAcat-EGFP/hDOR-3.
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相关学者/机构
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内容分析
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(/年)
文献信息
篇名
基于高内涵分析方法建立稳定共表达人δ阿片受体与 PKAcat-EGFP的CHO细胞模型
来源期刊
中国药理学与毒理学杂志
学科
医学
关键词
受体,阿片,δ
蛋白激酶A
高内涵分析
信号转导
CHO细胞
年,卷(期)
2018,(3)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
176-182
页数
7页
分类号
R965
字数
4116字
语种
中文
DOI
10.3867/j.issn.1000-3002.2018.03.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
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1
王莉莉
军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
2
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3
颜慧
军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
8
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李玉蕾
军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
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宫泽辉
军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所
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研究主题发展历程
节点文献
受体,阿片,δ
蛋白激酶A
高内涵分析
信号转导
CHO细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国药理学与毒理学杂志
主办单位:
军事医学科学院毒物药物研究所
中国药理学会
中国毒理学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-3002
CN:
11-1155/R
开本:
大16开
出版地:
北京太平路27号
邮发代号:
82-140
创刊时间:
1986
语种:
chi
出版文献量(篇)
2901
总下载数(次)
9
总被引数(次)
24241
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