阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 受体 阿片样 δ 绿色荧光蛋白质类 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1442-1444
• 页数: 3页
• 分类号: Q7
• 语种: 中文

摘要

目的 构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2δEGFP),并实现其在CHO细胞中的表达.方法 以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达.结果 测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光.应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的 基因表达.结论 成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达.