pIRES2－MLAA34－EGFP穿梭载体的构建及表达

• 作者: 吕扬 张东红 范业宁 赵佳琪 赵天宇 赵臣 马春平
• 来源期刊: 吉林医药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 急性白血病 MLAA-34 免疫治疗 核酸疫苗
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 184-187
• 页数: 4页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3188字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建pIRES2－MLAA34－EGFP重组质粒，并对其进行原核诱导表达。方法用RT－PCR的方法从U937细胞中提取 MLAA－34基因，利用酶切 T4连接等分子生物学技术将 MLAA－34目的基因克隆至pIRES2－EGFP表达载体中，经PCR 酶切等技术对构建的重组表达载体pIRES2－MLAA34－EGFP进行鉴定后，转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达。结果扩增出MLAA－34全长基因1014 bp，构建了pIRES2－MLAA34－EG－FP重组质粒，经PCR和双酶切鉴定，与预期大小一致。重组质粒在大肠杆菌中经IPTG诱导和SDS－PAGE检测，所表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。结论成功构建了pIRES2－MLAA34－EGFP重组质粒，并使其在大肠杆菌中高效表达。