新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

• 作者: 司履生 杨军 王一理
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 昆虫杆状病毒表达系统 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 433-436,459
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2006.05.004

摘要

目的 构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP.方法 用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转化E.coli DH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Ac-EGFP;感染Sf-9昆虫细胞;利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达.非变性法纯化EGFP.结果 荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP;通过SDS-PAGE获得的EGFP,大小为27 ku.结论 重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨军	西安交通大学医学院第二附属医院病理科	107	709	15.0	20.0
3	王一理		4	26	3.0	4.0
6	司履生		2	7	2.0	2.0