猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化

• 作者: 夏应菊 张乾义 徐璐 朱元源 李翠 牛康 王琴 赵启祖 邹兴启
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪瘟病毒 Erns蛋白 杆状病毒系统 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 31-35,38,中插2
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4+3
• 语种: 中文

摘要

采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒Erns蛋白,并对其反应原性进行鉴定.将猪瘟病毒的Erns基因克隆至pFastbac-HT-A载体上,构建了pFA-Erns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-Erns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件.将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting鉴定Erns蛋白的反应性,并采用间接ELISA方法对其应用进行了初步探索.结果 显示,获得了重组杆状病毒rBac-Erns,经Western Blotting和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和Erns单抗发生特异性反应.纯化后的Erns蛋白纯度较好,浓度为0.2 mg/mL,经Western Blotting方法鉴定证明,纯化后的蛋白与Erns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清.表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒Erns蛋白,纯化后的Erns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于Erns蛋白的结构和生物学功能研究.