猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测

• 作者: 刘运超 宋亚鹏 张改平 柴书军 白怡霖 魏蔷
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 Erns蛋白 分泌表达 糖基化分析 活性 杆状病毒
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.02.018

摘要

为制备用于ELISA检测猪瘟病毒的Erns蛋白,根据昆虫细胞密码子偏好性对Erns的基因序列进行优化,将优化后的Erns基因插入带有信号肽的表达载体pFastBacl-gp67中;随后将重组质粒pFastBacl-gp67-Erns转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,挑选白斑,提取重组黏粒Bacmid -Erns;将重组黏粒转染sf21细胞得到杆状病毒,经扩增后得到P3病毒,利用其大量感染细胞,3d后收取细胞培养上清;通过镍填料纯化得到分泌表达的Erns蛋白,通过SDS-PAGE及Western blot 检测分泌蛋白的表达水平、纯化情况,用PNGase F处理分析其糖基化水平,通过ELISA分析其抗原性.结果 显示,成功构建了重组质粒pFastBacl-gp67-Erns,蓝白斑筛选获得了重组黏粒Bacmid-Erns,在此基础上获得了重组杆状病毒,利用其感染sf21细胞,成功分泌表达了Erns蛋白,纯化所得Erns蛋白纯度较高,具有较高糖基化修饰水平,且纯化所得Erns蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清,其抗原性良好.