真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL的构建及鉴定

• 作者: 刘景丰 方航荣 邱明链 陈丽红
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 FasL 增强型绿色荧光蛋白 载体 基因重组
• 年，卷（期）: 2011,（31）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5839-5842
• 分类号: R318
• 字数: 3489字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.31.033

摘要

背景:FasL通过与靶细胞上Fas结合诱导程序性细胞死亡,可维持机体内稳态,诱导同种异基因移植免疫耐受,促进肿瘤细胞凋亡.目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因hFasL的真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL.方法:通过实时聚合酶链反应RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hFasL基因,与真核空载体 plRES2-EGFP一起,经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接,从而构建pIRES2-EGFP-hFasL.用紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度,经酶切、PCR技术、基因测序等方法进行鉴定.结果与结论:扩增出的hFasL条带大小约846 bp,构建的plRES2-EGFP-hFasL经酶切后在846 bp和2 000 bp处有特异性条带,DNA测序证实hFasL与Genebank上的序列完全一致.提示成功构建了含有hFasL及EGFP的真核表达载体plRES2-EGFP-hFasL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈丽红	福建医科大学基础医学院病理系	94	480	11.0	18.0
2	刘景丰	福建医科大学附属第一医院肝病中心	117	554	11.0	17.0
3	邱明链	福建医科大学附属第一医院胸外科	33	125	6.0	10.0
4	方航荣	西安医学院附属医院病理科	13	20	3.0	4.0