pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒真核表达载体的构建与表达

• 作者: 李亦凡 汪扬 韩陈陈 马旸 魏伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: pIRES-EGFP-GRK2-S670A突变质粒 重组质粒 细胞转染
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1547-1551
• 页数: 5页
• 分类号: R394.112|R394.34
• 字数: 3648字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.034

摘要

GRK2-S670A突变体导入pIRES-EGFP真核表达载体,为寻找GRK2磷酸化GPCR的位点提供研究基础.利用PCR定点突变试剂盒,获得pGEM-T-GRK2-S670A,用Sal Ⅰ/Apa Ⅰ分别对pGEM-T-GRK2-S670A和EGFP-C3双酶切,构建EGFP-C3-GRK2-S670A,Sal Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切EGFP-C3-GRK2-S670A和pIRES-EGFP,得到 pIRES-EGFP-GRK2-S670A.将构建的质粒转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察和Western blot法检测融合蛋白的表达.酶切鉴定显示pIRES-EGFP-GRK2-S670A质粒条带大小符合,测序结果正确,成功构建pIRES-EGFP-GRK2-S670A真核表达质粒,转染HEK293细胞后可见融合蛋白表达,为后续研究奠定基础.