脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达

• 作者: 刘勇 张军峰 张蓬勃 田玉梅 石秦东 陈新林
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 脑源性神经营养因子 绿色荧光蛋白 融合蛋白 Hela细胞
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 141-144
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究.方法 以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒.以脂质体Lipofectamine2000 转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot 及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位.结果 酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT PCR证实BDNF EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF EGFP融合蛋白存在. 结论成功构建了BDNF EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外.