真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B的构建及在293T细胞中的表达

• 作者: 张宝 徐锡金 梁晓 陈刚建 陈松建 霍霞
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脊髓损伤 血小板衍化生长因子B 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3813-3815
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2008.22.006

摘要

目的:构建人基因血小板衍化生长因子B(PDGF-B)真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达.方法:采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达载体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定正确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白,并可分泌到细胞外.结论:成功构建了PDGF-B真核表达载体,为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础. 含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达裁体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定 确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	霍霞	汕头大学医学院中心实验室	125	898	17.0	24.0
2	徐锡金	汕头大学医学院中心实验室	97	527	12.0	19.0
3	张宝	汕头大学医学院中心实验室	5	26	3.0	5.0
4	梁晓	汕头大学医学院中心实验室	4	14	2.0	3.0
5	陈松建	汕头大学医学院中心实验室	3	37	2.0	3.0
6	陈刚建	汕头大学医学院中心实验室	2	5	2.0	2.0