IL-37融合EGFP真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

• 作者: 何素辉 刘倩 梁庄严 王森 陈章权
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 白介素-37 绿色荧光蛋白 表达载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1399-1402,1403
• 页数: 5页
• 字数: 4058字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2015.09.005

摘要

目的：构建白介素－37（interleukin-37，IL-37）与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein， EGFP）融合基因真核表达载体，并检测其在293T细胞中的表达。方法：通过PCR分别扩增出IL-37和EGFP基因，经酶切和测序鉴定正确后，克隆入真核表达载体 pcDNA3．1，用 Linker（G4S）3连接2个目的基因片段，构建 IL-37-GFP 融合基因真核表达质粒 pcDNA3．1／IL-37-EGFP，将其转染到293T 细胞中，观察荧光产生情况，用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测IL-37的表达情况。结果：经酶切和测序鉴定，由linker连接的IL-37-GFP 融合基因正确克隆入表达载体pcDNA3．1，重组表达质粒 pcDNA3．1／IL-37-EGFP转染293T 细胞后，用荧光显微镜检测显示荧光蛋白在细胞中表达，RT-PCR 与 Western blot 均检测到高水平IL-37 mRNA 和IL-37蛋白的表达。结论：成功构建了IL-37-融合报告基因 EGFP 的真核表达载体，并在293T细胞中得到了有效表达，为进一步研究IL-37的功能和表达调控奠定了实验基础。