猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

• 作者: 卫恒习 孟立 张守全 徐桢 李莉 陈云
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 RUVBL2基因 真核表达载体 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 146-150
• 页数: 5页
• 分类号: S828.2
• 字数: 3356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20190410-08

摘要

RUVBL2(RuvB-like 2)蛋白是进化上高度保守AAA+(ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA)家族成员之一,CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白.为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP(Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP)载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测.结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达.本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达.