稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定

• 作者: 倪冷 刘昌伟 吴为 宋希涛 李砚川 杨根欢 王占启
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 血红素加氧酶-1 慢病毒 稳定细胞株 氧化损伤
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 420-425
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2014.04.013

摘要

目的 构建稳定表达人血红素加氧酶-1 (HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用.方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒.用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测H0-1的表达.将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒.用携带H0-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测H0-1的表达.将过氧化氢加入正常的及过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量.结果 成功筛选出能稳定表达H0-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其H0-1的表达明显升高.加入过氧化氢后,过表达H0-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少.结论 成功构建了能稳定表达人H0-1的细胞系,内源性过表达H0-1能够对抗细胞的氧化损伤.