稳定表达人源α2A-肾上腺素受体细胞系的建立

• 作者: 刘梦 周培岚 宫泽辉 李玉蕾 杨怿 苏瑞斌
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 中国仓鼠卵巢细胞 受体,肾上腺素α2A 蛋白激酶A cAMP
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 576-581
• 页数: 6页
• 分类号: R965.1
• 字数: 4916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2016.05.015

摘要

目的：建立稳定表达人源α2A-肾上腺素能受体（α2A-AR）的细胞系。方法将带有潮霉素B（Hygro）抗性的α2A-AR（pcDNA3.1/Hygro-HA-α2A-AR）重组质粒通过脂质体介导转染至已表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的蛋白激酶A催化亚基（PKAcat）的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞（以Hygro 200 mg·L-1进行压力筛选后，采用PKA重分布实验筛选阳性克隆），然后使用实时定量PCR验证α2A-AR受体在转录水平的表达，最后以时间分辨荧光共振能量转移免疫实验检测cAMP含量以鉴定受体功能。结果 PKA重分布实验结果表明，CHO-PKAcat-α2A-AR 7号克隆反应性良好；与CHO-PKAcat-EGFP细胞相比，该细胞系α2A-AR mRNA表达水平较高（P<0.01），且多次传代能保持稳定；在α2A-AR激动剂作用后，能显著抑制forskolin引起的cAMP水平升高（P<0.01）。结论成功构建稳定表达α2A-AR的CHO-PKAcat-α2A-AR细胞系，可用于药物筛选及机制研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏瑞斌	军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室	105	337	9.0	12.0
2	周培岚	军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室	21	62	5.0	6.0
3	李玉蕾	军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室	5	8	2.0	2.0
4	杨怿	军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室	1	3	1.0	1.0
5	刘梦	军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室	1	3	1.0	1.0