人源去甲肾上腺素转运蛋白稳定表达细胞系的构建及其功能鉴定

• 作者: 安磊 张有志 李云峰 李锦 李静 金增亮
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 去甲肾上腺素转运蛋白 HEK293细胞 抗抑郁药 去甲肾上腺素 细胞转染
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 92-97
• 页数: 6页
• 分类号: R965.1|R964
• 字数: 4299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2015.01.015

摘要

目的 构建人源去甲肾上腺素转运蛋白(hNET)稳定表达细胞系,并对细胞系hNET的结合和重摄取功能进行研究.方法 采用脂质体转染法将hNET转染于母细胞-人胚肾(HEK) 293细胞(HEK293-hNET);采用RT-PCR和Western蛋白质印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hNET细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配基结合实验检测HEK293-hNET的结合和重摄取功能.并采用三环类抗抑郁药地昔帕明(DIM)和5-羟色胺/去甲肾上腺素双重重摄取抑制剂度洛西汀(DLX),在0～1×10-4 mol·L-1浓度梯度范围绘制药物与hNET的结合与重摄取抑制曲线,进一步验证HEK293-hNET细胞系的结合和重摄取功能.结果 RT-PCR和Western蛋白质印迹实验结果表明,所建立的HEK293-hNET细胞系在15代内均稳定表达hNET;放射性配基结合实验表明,HEK293-hNET细胞具有内源性hNET的结合和重摄取功能.并且,DIM和DLX与HEK293-hNET细胞中hNET具有明显的特异性结合(Ki值分别为2.45和3.40 nmol· L-1),并可显著抑制hNET对去甲肾上腺素的重摄取作用(IC50分别为5.78和10.23 nmol· L-1).结论 成功建立的可稳定表达hNET的HEK293-hNET细胞系具有内源性hNET的结合和重摄取功能,可用于hNET靶标药物研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李锦	军事医学科学院毒物药物研究所	117	391	11.0	13.0
2	李云峰	军事医学科学院毒物药物研究所	95	1343	19.0	33.0
3	张有志	军事医学科学院毒物药物研究所	47	440	13.0	19.0
4	李静	军事医学科学院毒物药物研究所	22	73	6.0	7.0
8	安磊	北京工商大学食品学院	3	6	1.0	2.0
12	金增亮	军事医学科学院毒物药物研究所	1	0	0.0	0.0