人源5-羟色胺转运体稳定表达细胞系的建立及其功能探究

• 作者: 安磊 张有志 李云峰 李锦 李静 金增亮
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 5-羟色胺转运体(SERT) HEK293 抗抑郁药 5-HT 细胞转染
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 681-684
• 分类号: Q2
• 字数: 3816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.09.011

摘要

目的 建立人源5-羟色胺转运体(human serotonin transporter,hSERT)稳定表达细胞系,并对细胞系hSERT的结合活性和重摄取功能进行初步研究.方法采用脂质体转染法将hSERT转染于母细胞,即人胚胎肾(human embryo kidney,HEK)293细胞,应用抗生素G418(800 μg/ml)压力筛选,并采用RT-PCR和Western印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hSERT细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配体结合实验检测其与氚标西酞普兰([3H]-citalopram)的结合活性,并检测其对[3H]5-HT的重摄取功能.结果 RT-PCR和Western印迹结果表明,所建立的HEK293-hSERT细胞系在15代内(P1,P5,P10,P15)均稳定表达hSERT;放射配体结合实验表明,HEK293-hSERT细胞系与[3H]-西酞普兰具有明显的特异性结合;并且在100 nmol/L [3H]5-HT条件下,具有明显的5-HT重摄取功能,这一作用可被10 μmol/L的氟西汀所阻断,而母细胞HEK293无此功能.结论 本研究所建立的HEK293-hSERT细胞系可稳定表达SERT,并且具有内源性SERT的结合和重摄取功能,是一种稳定表达功能性hSERT的细胞系.