使用RNAi技术抑制HeLa细胞p42MAPK表达

• 作者: 倪磊 刘利英 司履生 宋丽萍 宋土生 胡劲松 赵小鸽 黄辰
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HeLa细胞 肿瘤,实验性 p42 MAP激酶
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 292-295
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3556字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-5807.2006.05.010

摘要

目的筛选可抑制HeLa细胞p42MAPK表达的siRNA.方法采用体外转录合成的方法,合成针对p42MAPK的siRNA 3条和阴性对照siRNA 1条,并进行Cy-3荧光标记,用脂质体转染HeLa细胞,以判断转染效果.应用噻唑蓝(MTF)法和流式细胞仪检测siRNA的作用效果,筛选具有功能的siRNA序列;应用Western blot方法鉴定siRNA抑制p42MAPK表达的效果.结果从3条p42MAPKsiRNA中筛选出2条有效的序列siRNA-2和siRNA-3,与空白对照组、脂质体对照组和随机siRNA-4相比,两者均可诱导HeLa细胞p42MAPK表达下调,Western blot结果分析显示,与随机siRNA-4相比分别下调了1/2和2/3,并抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),同时改变了细胞周期各时相的细胞分布.结论p42MAPK siRNA-2和siRNA-3在体外实验中可沉默目的基因以及抑制HeLa细胞增殖.