高盐极端环境土壤基因组DNA的分离纯化方法研究及基因文库的构建

• 作者: 唐莉丽 孙栋 杨冬梅 武波 王倩倩 蒋承建
• 来源期刊: 广西农业生物科学
• 学科: 农学
• 关键词: 土壤 DNA提取 DNA纯化 混合基因组DNA文库
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术专栏
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: S154.39
• 字数: 3933字
• 语种: 中文

摘要

以钦州市犀牛角镇晒盐池内(盐浓度＞25%)的土壤样品为研究对象,对土壤混合基因组DNA的提取和纯化方法进行了深入研究,结果表明,冻融法、十二烷基磺酸钠(SDS)和蛋白酶K联合使用的提取法,能有效提高DNA得率,DNA的产量达到每克土壤样品10～15μg.交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、SephadexG-200树脂以及大量胶回收的使用,可有效纯化DNA,纯化的DNA产量可达每克土壤样品4～6μg,DNA片段大小＞30kb.将纯化的DNA用BamHⅠ部分酶切后构建以pLAFR3为载体的混合基因组文库,该文库包含15 600个克隆,外源片段DNA平均大小为18kb.通过DNA序列测定和同源性比较,对从文库中随机挑取的10个克隆进行了序列分析,发现9个外源插入片段包含未知DNA序列.