一种抗菌肽和aFGF融合蛋白的构建和表达

• 作者: 丁长才 周权男 李校堃 王艳萍 苏志坚
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 天蚕素蜂毒素杂合肽 人酸性成纤维细胞生长因子 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.01.006

摘要

利用PCR技术扩增出带有凝血酶Xa因子切割位点的天蚕素蜂毒素杂合肽和aFGF的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出表达质粒pET-aF-CM,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4h后,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的17%.将包涵体溶解后透析复性,并利用肝素亲和层析纯化,得到电泳纯的融合蛋白.Western blot分析表明,该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应.MTT法检测显示,融合蛋白具有促3T3Bal/b细胞分裂活性,其比活为1.471×106IU/mg.利用凝血酶Xa因子裂解融合蛋白,可以获得抗菌肽和含凝血酶Xa因子裂解序列的aFGF蛋白.分子筛回收含杂合抗菌肽,抑菌活性检测表明其对大肠杆菌K12D31具有明显抑菌活性.微量稀释法检测结果表明,回收的抗菌肽对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌K12D31、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的MIC分别达6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和5μg/ml.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李校堃	温州医学院药学院	125	899	15.0	21.0
2	苏志坚	暨南大学药学院	51	273	8.0	14.0
3	丁长才	暨南大学药学院	5	20	3.0	4.0
4	王艳萍	吉林农业大学生物工程技术研究院	4	19	2.0	4.0
5	周权男	暨南大学药学院	1	8	1.0	1.0