抑制性消减杂交构建乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个氨基酸cDNA文库

• 作者: 朱明华 李咏梅 李芳梅 王力
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒X蛋白 基因文库 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1081-1084
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 2808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.10.010

摘要

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白羧基端缺失40个氨基酸(HBx3'-40)反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法:以HBx3'-40蛋白表达质粒pcDNA3(-)-HBx3'-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3(-)-HBx为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取总RNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pUCm-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建了HBx3'-40反式激活基因差异表达的cDNA文库,文库扩增后得到154个白色克隆,经菌落PCR分析,克隆包含有200～800 bp的插入片段,部分片段编码蛋白涉及原癌基因、信号转导相关基因、细胞生长因子相关基因、细胞凋亡、代谢和蛋白合成等相关基因.结论:应用抑制性消减杂交技术成功构建了HBx和HBx3'-40差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HBx3'-40在HBV感染相关的肝细胞癌发生中的分子生物学机制提供理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱明华	第二军医大学长海医院病理科	175	988	15.0	23.0
2	李芳梅	第二军医大学长海医院病理科	18	81	5.0	8.0
3	王力	成都军医昆明总医院病理科	2	7	1.0	2.0
4	李咏梅	第二军医大学长海医院病理科	5	38	3.0	5.0