应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库

• 作者: 万为人 佟万成 徐劲松 蔡绍曦 赵海金 邹飞
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 哮喘 嗜酸细胞 基因文库 抑制消减杂交
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 857-860
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 5242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2004.08.001

摘要

目的:构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库.方法:采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用PCR进行扩增,90%的克隆中均有200～600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段.结论:用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础.