应用抑制消减杂交技术构建结核分枝杆菌差异表达基因消减cDNA文库

• 作者: 刘艳群 杜先智
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌,结核 抑制性消减杂交 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 61-65
• 页数: 5页
• 分类号: R328
• 字数: 4728字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建结核分枝杆菌H37Rv与H37Ra的差异表达基因消减文库,分离结核分枝杆菌差异表达cDNA片段.方法:利用抑制性消减杂交技术分析结核分枝杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra的基因组mRNA的表达差异,并进行两轮消减杂交和两次PCR,将第二次PCR产物与pGEM-T载体相连,电击转化大肠杆菌E.coff DH5α进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR承鉴定差异表达文库.结果:以结核分枝杆菌强毒株H37Rv的cDNA为检测子的正相杂交和以弱毒株H37Ra的cDNA为检测子的反相杂交各自高表达或特异性表达的片段都得到选择性扩增,成功构建了差异表达cDNA文库 A库和B库.所长出的菌落中90%为白色克隆,其中单一条带的克隆占75%和80%,片段大小集中在100～800 bp之间.结论:利用SSH技术成功构建了结核分枝杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra差异表达基因消减cDNA文库,该消减文库的建立为进一步筛选、克隆这两种菌株之间差异表达的新基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜先智	重庆医科大学第二附属医院呼吸内科	69	272	8.0	12.0
2	刘艳群	重庆医科大学第二附属医院呼吸内科	3	7	1.0	2.0