高凝状态大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库的构建

• 作者: 刘秉文 张朝良 方定志 沈涛 白怀
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 高凝状态 大鼠模型 肝脏 差异表达基因 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 149-153
• 页数: 5页
• 分类号: R541.1
• 字数: 4864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2004.02.001

摘要

目的构建高凝状态(prothrombotic states, PTS)大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库.方法用高淀粉饲料喂养制备大鼠PTS模型,从PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取poly A+ mRNA,分别以1.5 μg poly A+ mRNA起始,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段.以PTS大鼠cDNA作为Driver,对照大鼠cDNA为Tester.将Tester分为两组,分别连上不同的接头,与Driver进行两次消减杂交和两次抑制性PCR.将第二次PCR产物cDNA克隆至pMD18-T载体上,然后转化细菌.转化后的细菌接种于含50 μg/ml ampicillin、IPTG、和X-gal的LB琼脂平板上,将克隆计数.结果获得的克隆78%为白色克隆,成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库.结论以1.5 μg poly A+ mRNA起始,采用抑制性消减杂交,构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因反向消减cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘秉文	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	47	275	10.0	13.0
2	白怀	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	44	192	9.0	10.0
3	沈涛	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	12	47	5.0	6.0
4	方定志	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	45	372	10.0	17.0
5	张朝良	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	20	83	5.0	8.0