高凝状态大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库的构建与初筛

• 作者: 刘秉文 方定志 沈涛 白怀
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 高凝状态 大鼠模型 差异表达基因 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 761-764
• 页数: 4页
• 分类号: R541.1
• 字数: 2588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.06.001

摘要

目的构建高凝状态(prothrombotic states,PTS)大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库并进行初步筛选.方法从PTS模型大鼠和对照大鼠肝脏提取poly A+ mRNA,分别以poly A+ mRNA为模板,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成400～600 bp大小的片段.以PTS大鼠cDNA作为Tester,对照大鼠cDNA为Driver,进行抑制性消减杂交.将消减杂交第二次PCR产物cDNA克隆至pMD18-T载体上,然后转化细菌,获得PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库.用巢式PCR扩增法制备"正向"和"反向"消减cDNA探针;采用差异筛选方法,用这两种探针对PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库进行筛选;将获得的阳性克隆cDNA进行序列分析;并与GenBank DNA 数据库中的DNA序列进行同源性分析.结果成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库,初步筛选发现两条PTS差异表达cDNA片段.结论成功构建了PTS大鼠肝脏差异表达基因正向消减cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘秉文	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	47	275	10.0	13.0
2	白怀	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	44	192	9.0	10.0
3	沈涛	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	12	47	5.0	6.0
4	方定志	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	45	372	10.0	17.0