特异siRNA抑制宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒16型E6表达的研究

• 作者: 于修平 周亚滨 栾怡 白晓卉 赵蔚明
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头状瘤病毒 siRNA 子宫颈肿瘤 细胞生长
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 598-602
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.07.005

摘要

目的优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA,抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响.方法选择4个分别针对HPV-16E6mRNA外显子和内含子序列为靶序列,合成DNA链,构建表达HPV-16E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1.0-U6载体,导入HPV-16 DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中,观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化,并观察细胞生长被抑制的情况.结果4种HPV-16E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率.通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96 h内,可降低细胞生长速度.荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低,其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平.West-ern blot分析表明,4个HPV-16E6siRNA作用72 h后,未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16E6蛋白.结论HPV-16 E6siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢;选择针对E6内含子的siRNA作用位点,特异性抑制E6表达;而针对E6外显子的siRNA作用位点,可抑制E6和E7基因的表达,是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位.