甜槠ISSR-PCR反应体系的正交优化

• 作者: 张文标 李钧敏 潘冠琼 金则新
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 植物学 ISSR-PCR 正交设计 优化 甜槠
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 页码范围: 516-520
• 页数: 5页
• 分类号: Q946|S792.17
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0756.2006.05.009

摘要

对甜槠Castanopsis eyrei进行遗传多样性研究的过程中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,利用正交设计对Mg2+,dNTP,引物,Taq酶,牛血清蛋白(BSA)和模板DNA等6种因素5个水平进行筛选和优化.确定甜槠ISSR-PCR最适宜反应体系为:10 μL反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol·L-1 Tris-HCl,pH 9.0,50 mmol·L-1 KCl,10 g·L-1 TritonX-100),1.7 mmol·L-1Mg2+,0.25 mmol·L-1 dNTP,8.34 nkat TaqDNA 聚合酶,1.5 g·L-1牛血清白蛋白,6 pmol引物,12 ng模板DNA.甜槠扩增时引物UBC846的最适退火温度为56.3 ℃.图2表1参23