Tat蛋白转导结构域介导HSV1-TK导入肝癌细胞及其效应

• 作者: 代维 刘静 叶庆 司进 曹利民 朱荫昌 沈关心 王炜煜 赵晓蓉 雷萍
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1 Tat HSV1-TK 蛋白转导 肝癌 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 162-166
• 页数: 5页
• 分类号: R730
• 字数: 3483字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2006.03.002

摘要

目的:探讨HIV-1编码的反式激活蛋白Tat与HSV1-TK融合表达对肝癌细胞的杀伤效果.方法:合成编码HIV-Tat47-57(Tat11)的2条寡核苷酸单链,两端分别引入BamH Ⅰ和HindⅢ两个酶切位点,退火形成寡核苷酸双链,15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳判断退火效果;以r-pAs16Dr为模板,通过PCR扩增HSV1-TK基因,定向克隆至原核表达载体pET32中.将含pET-32c-Tat11-TK的BL21菌通过IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫组化分析重组蛋白Tat11-TK的膜结合特性,蛋白印迹技术分析该融合蛋白的穿膜能力,检测和分析TK/GCV、Tat11-TK/GCV对肝癌细胞株HepG2的杀伤作用.结果:表达产物SDS-PAGE在相对分子质量60 700左右显示条带,符合Tat11-TK与表达标签融合蛋白的理论值,并证明以包涵体的形式表达;通过Ni2+螯合柱亲和纯化获得的Tat11-TK重组融合蛋白,经免疫组化证实能结合到肝癌细胞表面,蛋白印迹结果说明Tat11-TK能有效穿过细胞膜进入HepG2细胞内,同时应用低浓度前药更昔洛韦(GCV,150μmol/L)能有效抑制HepG2细胞生长.结论:Tat 11-TK在原核系统获得高效表达,具有较强的穿膜能力和前药酶活性.