生存素启动子调控HSV1-TK真核表达载体的构建及其对A549肺癌细胞系的杀伤作用

• 作者: 曹利民 王炜煜 郁震
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 基因治疗 生存素 启动子 单纯疱疹病毒1型胸苷激酶
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 373-376,381
• 分类号: R34
• 字数: 3738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.05.002

摘要

目的:构建生存素(survivin,SURV)启动子调控的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)基因表达载体,检测该启动子的活性和特异性,观察该基因对大鼠体内肺癌生长的抑制功能. 方法:酶切回收SURV启动子、CMV启动子;PCR扩增HSV1-TK基因;将上述片段与含有报告基因荧光素酶基因(Luciferase,Luc)的载体pGL3-Basic的多克隆位点连接,分别构建成为SURV、CMV启动子调控的HSV1-TK、Luc真核表达载体(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),用脂质体法将表达载体转染A549细胞系,蛋白质印迹法检测TK基因的表达,更昔洛韦细胞毒实验观察TK蛋白的酶活性,肿瘤生长抑制实验证实pSURV-TK的抑瘤功能. 结果:成功地将SURV基因启动子、CMV启动子,HSV1-TK克隆到报告基因载体pGL3 的多克隆位点,酶切鉴定和DNA 序列分析无误, 蛋白质印迹证实pSURV-TK在肺癌细胞A549中可特异性表达出TK蛋白,更昔洛韦细胞毒实验表明表达的TK蛋白具有酶活性,并可有效抑制体内肺癌的生长. 结论:SURV启动子调控的TK基因治疗载体,可特异性调控TK基因在A594肺癌细胞的表达并抑制肺癌细胞的生长,为应用自杀基因治疗肺癌提供了新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王炜煜	华中科技大学附属同济医院普外科	15	65	5.0	7.0
2	郁震	无锡市人民医院呼吸科	6	16	2.0	3.0
3	曹利民		3	4	1.0	1.0