HSV-TK与IL-2共表达真核载体的构建及其在A549细胞中的表达

• 作者: 宋青凤 徐永健 方慧娟 曹勇 熊盛道 熊维宁
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 基因治疗 单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK) IL-2
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 194-198
• 页数: 5页
• 分类号: R73-36|R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2009.03.007

摘要

目的 构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和人类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)的联合表达质粒载体并观察其在人类肺腺癌细胞系A549细胞中的表达.方法 设计、合成多克隆位点(MCS)插入到质粒pSNAV中,然后分别从其他不同的质粒剪切片段HSV-TK、内部核糖体进入位点(IRES)、IL-2并依次接入到MCS中,最终得到目的 质粒pSNAv-TK-IRES-IL2(pMTⅡ).目的 质粒经酶切、DNA测序鉴定正确后,转染到A549细胞中.用RT-PCR方法 、ELISA法检测转染后细胞目的 基因的转录和表达;进一步倒置显微镜观察、MTT法检测更昔洛(GCV)对转然后细胞的杀伤作用.结果 经酶切、DNA测序、RT-PCR法和ELISA法鉴定,双基因真核表达载体pMTⅡ序列正确并能有效表达.进一步倒置显微镜观察和MTT法检测表明HSV-TK/GCV自杀基因系统对A549细胞有明显的杀伤作用.结论 成功构建了pMTⅡ真核表达载体,并观察了其对A549细胞的杀伤效应,为进一步研究HSV-TK/GCV联合IL-2基因治疗肺癌提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹勇	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	52	910	17.0	29.0
2	徐永健	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	297	2251	20.0	31.0
3	熊盛道	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	85	366	10.0	13.0
4	熊维宁	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	54	483	9.0	19.0
5	方慧娟	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	19	190	6.0	13.0
6	宋青凤	华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科	1	3	1.0	1.0