稳定表达MRG15基因的人晶状体上皮细胞株的建立

• 作者: 刘新平 周健 崔志利 张健 张自峰 惠延年 惠玲 王雨生 药立波
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MRG15基因 年龄相关性白内障 晶状体上皮细胞 克隆
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 555-557
• 页数: 3页
• 分类号: R77
• 字数: 3474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2006.03.013

摘要

目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-lated gene on chromosome 15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)发生中相关功能的研究奠定基础.方法:采用RT-PCR由人ARC晶状体前囊膜标本中扩增MRG15的编码区全长,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用脂质体法对培养人晶状体上皮细胞进行稳定转染,挑取单克隆,用Western blot进行MRG15表达的鉴定.结果:测序证实,由ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码区全长序列正确.重组质粒pcDNA3.1(+)-MRG15经酶切后释放出与理论长度相符的片段.培养人晶状体上皮细胞稳定转染挑取单克隆后,经Western blot检测,30个克隆中有19个MRG15的表达量明显增高.结论:克隆了人MRG15的编码区全长,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 (+)-MRG15,并建立了稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株.