牛胰腺核糖核酸酶A的基因克隆、表达及初步鉴定

• 作者: 孙怀昌 张泉 张鑫宇 朱鸿飞 袁燕
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Rnase A 克隆 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 1248-1252
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 3213字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.06.023

摘要

[目的]为了避免在制备基因治疗或基因免疫的质粒时使用动物源性的核糖核酸酶A(RNase A).[方法]提取牛胰腺总RNA,利用RT-PCR扩增出牛核糖核酸酶A cDNA,RT-PCR产物克隆到pGEM-T载体测序验证后,将此cDNA亚克隆到大肠杆菌分泌型表达载体pEZZ18中.[结果]SDS-PAGE电泳显示其转化菌经温度诱导后能表达预计的大小为28 kD重组蛋白.用渗透法释放出表达产物,将其加入到经碱裂解粗提的质粒DNA中并孵育0.5 h,琼脂糖凝胶结果表明表达产物能很好地去除细菌的RNA并且不降解超螺旋质粒DNA.[结论]在质粒的纯化过程中,重组牛核糖核酸酶可以替代动物源性的RNase A.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张鑫宇	扬州大学兽医学院	40	142	6.0	10.0
3	张泉	扬州大学兽医学院	51	346	8.0	17.0
4	袁燕	扬州大学兽医学院	85	327	10.0	14.0
5	朱鸿飞	中国农业科学院生物制品工程技术中心	55	257	8.0	13.0