大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究

• 作者: 刘宏鸣 刘宝华 杨俊涛 申海军 肖静 金世龙 顾红光
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝卵圆细胞 细胞培养 诱导分化
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2259-2262
• 页数: 4页
• 分类号: R322.47|R329.28
• 字数: 4681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.22.017

摘要

目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法,用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF、LIF等生长因子联合应用诱导肝卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞.观察肝卵圆细胞到肝细胞形态变化过程,用免疫荧光技术,Western blotting分析检测了干细胞标志c-kit和RT-PCR分析法检测肝干细胞白蛋白和CK19 mRNA表达鉴定卵圆细胞.结果 分离得到的肝卵圆细胞活度达到90%,细胞形态包括大小和颜色呈不均质,卵圆细胞直径是肝细胞直径的1/4～1/6.诱导后出现大而圆的肝细胞,可见卵圆细胞到肝细胞的中间变化过程,新分离的肝卵圆细胞在生长因子诱导下有向肝细胞分化的特性.经c-kit免疫荧光染色显黄绿色荧光,Western blotting检测肝卵圆细胞有c-kit蛋白条带,而大鼠肝细胞及胆管细胞则未出现条带.PCR分析显示卵圆细胞有CK19和白蛋白mRNA表达.结论 新分离的肝卵圆细胞同时表达c-kit,CK19和白蛋白3种抗原,诱导分化出现一系列从卵圆细胞到肝细胞的形态学变化,这种现象证明分离的肝卵圆细胞就是肝干细胞,经诱导分化可以产生成熟的肝细胞,成为进一步研究肝干细胞生物学特性的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宝华	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	176	1341	19.0	24.0
2	金世龙	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	22	142	7.0	11.0
3	顾红光	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	49	229	8.0	12.0
4	刘宏鸣	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	39	232	9.0	13.0
5	杨俊涛	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	32	116	6.0	9.0
6	申海军	第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科	3	27	3.0	3.0