人高迁移率族蛋白1的原核细胞表达及其功能研究

• 作者: 刘亚伟 刘靖华 唐靖 姜勇 李志杰 赵雷 邓鹏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 高迁移率族蛋白质类 原核表达 细胞因子类 脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1119-1123
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.06.018

摘要

目的:构建带His标记的人高迁移率族蛋白1(HMGB1)融合蛋白原核细胞表达质粒,表达并纯化人HMGB1重组蛋白,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响.方法:首先将目的片段HMGB1亚克隆到改造的载体pET14b上,经鉴定、测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-HMGB1融合蛋白,用Ni-NTA亲和树脂纯化.将纯化得到的HMGB1蛋白经透析和过滤除菌后,刺激人脐静脉内皮细胞,24h后收集培养上清,经LiquiChip液相蛋白芯片系统检测细胞因子.结果:构建的pET14b/HMGB1表达质粒经酶切和测序验证正确;表达的目的蛋白经Western blotting验证能被His抗体识别;检查了纯化的HMGB1蛋白对HUVEC产生细胞因子的影响,发现重组的HMGB1可诱导白细胞介素8(IL-8)上调,并且呈剂量依赖性关系.结论:成功构建了His-HMGB1原核细胞表达质粒并纯化得到重组的HMGB1;在HUVEC模型上证实所得到的HMGB1蛋白具有生物学活性.本实验为进一步研究HMGB1的功能提供了重要的实验材料.