H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫/杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

• 作者: 于康震 刘光亮 刘娣 孟庆文 施建忠 童光志 陈化兰
• 来源期刊: 科技导报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒血凝素 重组杆状病毒 亚单位疫苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 禽流感研究专题
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: S855.3|S852.4
• 字数: 5066字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-7857.2006.03.002

摘要

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 H5N1亚型1.7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序.亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞.将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS-PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达.蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17.1%.Western-blot及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性.表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平.用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100%的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡;为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗、防制禽流感奠定了基础.