经phoenix细胞包装含人全长HGF基因的逆转录表达载体及体外感染骨髓间充质干细胞的研究

• 作者: 俞悦 王学浩
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 间充质干细胞 肝细胞生长因子 c-met
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1155-1158,封二
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2006.12.003

摘要

目的:构建含人全长肝细胞生长因子(HGF)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合的逆转录表达载体plEGFP-HGF,经phoenix细胞包装,病毒液感染骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),研究phoenix细胞的包装能力与病毒感染效率.方法:将人全长HGF cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pIEGFP-N1中,获得HGF定向插入重组子plEGFP-HGF,采用酶切法和测序法分别鉴定.用磷酸钙法经phoenix细胞包装,收集病毒上清,感染MSCs,经G418筛选获得阳性克隆,命名为HGF/MSCs细胞.ELISA法检测细胞培养上清中HGF,RT-PCR检测HGF受体c-met在MSCs中的表达.结果:重组逆转录病毒载体体系plEGFP-HGF经限制性内切酶切电泳后显示有2.3kb目的基因片段和6.9kb的线性化ppIEGFP-N1载体片段;荧光显微镜观察到GFP基因获得了表达.重组子测序结果与Gene bank中HGF-cDNA序列相符.RT-PCR检测转染细胞中c-met基因mRNA表达水平升高,ELISA法检测细胞培养上清中HGF升高.结论:重组真核表达载体构建正确并在MSCs中获得高效、稳定表达,为其在进一步的体内外研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞悦	南京医科大学第一附属医院肝脏外科	30	147	6.0	10.0
2	王学浩	南京医科大学第一附属医院肝脏外科	205	907	13.0	17.0