人全长HGF基因真核表达载体的构建及在骨髓间充质干细胞中表达的实验研究

• 作者: 俞悦 王学浩
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 肝细胞生长因子
• 年，卷（期）: 2006,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3556-3559
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2006.23.010

摘要

目的 构建含人全长肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因融合的真核表达质粒,研究HGF分子在骨髓间充质干细胞定向分化为肝细胞的作用.方法 将人全长HGF cDNA亚克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,获得HGF定向插入重组子pEGFP-HGF,采用酶切法和测序法分别鉴定.用阳离子脂质体Lipofectamine Reagent将pEGFP-HGF转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs),经G418筛选获得阳性克隆,命名为MSC/pEGFP-HGF细胞.ELISA法检测细胞培养上清中HGF,逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测HGF受体c-met在MSCs中的表达.结果 重组真核细胞表达载体体系pEGFP-HGF经限制性内切酶切电泳后显示有2.3 Kb目的基因片段和4.7 Kb的线性化pEGFP-N3载体片段;荧光显微镜观察到HGF基因获得了表达.重组子测序结果与Gene bank中HGF-cDNA序列相符.RT-PCR检测转染细胞中c-met基因mRNA表达水平升高,ELISA法检测细胞培养上清中HGF升高.结论 重组真核表达载体构建正确并在MSCs中获得高效、稳定表达,为MSCs进一步应用于体内外研究奠定了基础.