小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析

• 作者: 刘斌 刘玉峰 刘瑛 沈柱 陈凌
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 酸性哺乳动物几丁质酶 突变体 序列分析,DNA
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 231-233
• 页数: 3页
• 分类号: Q781
• 字数: 2357字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.03.017

摘要

目的克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase),并进行序列分析.方法从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因,构建pMD18-T/AMCase重组载体,测序后应用DNAMAN 4.0软件与标准序列进行比较,并通过SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析.结果所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51.93kD,等电点为4.73,与AMCase同源性达99.57%,同属18家族的几丁质酶成员,由信号肽(氨基酸1～21)、催化区(氨基酸22～391)、铰链区(氨基酸392～425)和结合区(氨基酸426～473)组成.编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸).结论所克隆的基因为AMCase的一个突变体,其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础.